iElisa 克倫特羅抗生素類檢測試劑盒

iElisa 克倫特羅抗生素類檢測試劑盒

iElisa克倫特羅檢測試劑盒

(C/N: CE2012-G) 

--－北京中檢維康生物技術(shù)有限公司

1、檢測原理

本試劑盒是利用競爭ELISA方法,，在酶標(biāo)板微孔上預(yù)包被抗克倫特羅抗原,。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,，克倫特羅抗體及酶標(biāo)記物,，包被抗原和加入樣本中的克倫特羅競爭性地與克倫特羅抗體結(jié)合后，再與酶標(biāo)記物形成抗原抗體復(fù)合物,，用TMB底物顯色,；加入反應(yīng)終止液，在450nm波長酶標(biāo)儀下進行檢測,，樣品中的克倫特羅濃度與吸收光強度成反比,。

2,、檢測范圍

本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的藥物殘留檢測產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)比較，能經(jīng)濟,、快速地檢測出尿樣,、肌肉、肝臟及飼料等中的克倫特羅,。

與類似物的交叉反應(yīng)率：

克倫特羅&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;100%

特布他林&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7%

沙丁胺醇&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;25%

鹽酸腎上腺素&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

去甲腎上腺素&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

萊克多巴胺&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

多巴酚丁胺&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

3,、試劑盒組成

1. 酶標(biāo)板1塊，96孔/板
2. 標(biāo)準(zhǔn)液6瓶（1mL/瓶）：

0 ppb,、0.2ppb,、0.6ppb、1.8ppb,、5.4ppb,、16.2ppb

1. 抗體工作液 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;9mL
2. 酶標(biāo)記物 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;3mL
3. 底物液A &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
4. 底物液B &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
5. 終止液   &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
6. 說明書 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;1份

4,、需要但試劑盒中不提供的器材和試劑

（1）設(shè)備

1. 微孔板酶標(biāo)儀(450nm)
2. 振蕩器
3. 離心機
4. 微量移液器：20μL～200μL,100μL~1000μL
5. 容量瓶：100mL,，500mL，1000mL

（2）試劑

1. 氫氧化鈉,、濃鹽酸,、乙酸乙酯、乙腈

5,、溶液的配制

樣本前處理需配制：

1. 配液1：0.1M鹽酸溶液

量取0.86mL濃鹽酸加去離子水混勻定容至100mL

1. 配液2：1M鹽酸溶液

量取8.6mL濃鹽酸加去離子水混勻定容至100mL

1. 配液3：0.1M氫氧化鈉溶液（組織樣本）

稱0.4gNaOH加去離子水混勻溶解,，定容至100mL

1. 配液4：1M氫氧化鈉溶液（飼料樣本）

稱4.0gNaOH加去離子水混勻溶解，定容至100mL

1. 配液5：乙腈-0.1M鹽酸（組織樣本）

乙腈與0.1M鹽酸溶液按體積比84:16混勻

6,、樣本前處理方法

樣本處理前須知

處理任何樣本時,，都須注意：

1. 實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭,。
2. 實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結(jié)果,。

樣本處理步驟：

尿樣

1. 尿樣（若渾濁可以4000轉(zhuǎn)/分 離心5分鐘,，取清亮部分）,取20μL進行分析。
2. 不用時應(yīng)冷凍保存,。

稀釋倍數(shù)為1

畜禽組織（雞,、鴨、豬肌肉/肝臟等）

1. 稱取2±0.05 g勻漿的樣品于50mL離心管中,，加入6mL乙腈-0.1M鹽酸,，振蕩5分鐘；室溫4000轉(zhuǎn)/分以上離心10分鐘,；
2. 取上清3mL,，加2mL 0.1M氫氧化鈉溶液,，6mL乙酸乙酯，振蕩5分鐘,；室溫4000轉(zhuǎn)/分,，以上離心10分鐘；
3. 取全部上清至干凈玻璃試管中,，于56℃水浴下氮氣/空氣吹干,；
4. 加1mL去離子水復(fù)溶，振蕩30秒,。
5. 取20μL進行分析,。

稀釋倍數(shù)為1。

飼料

1. 用食品粉碎機或乳缽研碎飼料樣品,，稱5±0.05 g研碎的飼料樣品,，加10mL乙腈；用振蕩器劇烈震蕩5分鐘,，室溫3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,；
2. 取3mL上層清亮有機相至10mL干凈的玻璃試管中，于50-60℃氮氣流下吹干,。
3. 加入1mL正己烷,，用渦旋儀渦旋30秒；再加入1mL去離子歲混合,，用渦旋儀渦旋1分鐘,，3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘；去除上層正己烷相,。
4. 取下層20μL進行分析,。

稀釋倍數(shù)為1。

7,、酶聯(lián)免疫檢測步驟

測定前須知：

1. 使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫,。
2. 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
3. 在使用中不要讓微孔干燥,。
4. 在ELISA分析中的重復(fù)性,，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點,。
5. 在所有恒溫孵育過程中,，避免光線照射，用該板膜蓋住微孔板,。

測定步驟：

1. 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,，在室溫下平衡30分鐘，每種液體使用前均須搖勻,。注意標(biāo)準(zhǔn)液均需做2個平行試驗,。
2. 加標(biāo)準(zhǔn)液或樣品液20μL到相應(yīng)的微孔中,，然后加20μL酶標(biāo)記物，80μL抗體工作液,，用膜蓋好,，25℃下避光反應(yīng)30分鐘。
3. 洗板：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干,，加去離子水 250mL/孔，每次浸泡15~30秒,，充分洗滌4~5次,，用吸水紙拍干。
4. 顯色：每孔先各加入底物液A 50μL,，再各加入底物液B 50μL,，輕輕晃蕩混勻，并在25℃下避光反應(yīng)15分鐘,。
5. 讀數(shù)：每孔各加50μL終止液,，在酶標(biāo)儀于450nm處測定OD值（建議用450/630nm雙波長檢測，在5分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）,。

8,、結(jié)果分析    

所測得的標(biāo)準(zhǔn)液或樣品吸光度的平均值（B）除以di一個標(biāo)準(zhǔn)液（0標(biāo)準(zhǔn)液）的吸光度（B<蘇b>0）值再乘以100%，得到百分吸光度值,。

百分吸光度值（%）＝B/B<蘇b>0 ×100%

        以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的10為底的對數(shù)為X軸， 百分吸光值為Y軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。將樣本的百分吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的值,，作為10的冪,，乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品中所含克倫特羅的量,。利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析,。/

9,、試劑盒靈敏度、準(zhǔn)確度,、精密度

試劑盒靈敏度：0.1ppb

樣本低檢測限：

尿樣&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.2ppb

組織&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.4ppb

飼料 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.4ppb

回收率：

尿樣  &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;90±10%

組織&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;85±10%

飼料  &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;80±15%

精密度：

 試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

10,、注意事項

1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,，重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3. 反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚,。如不慎滴漏到皮膚上，請盡快用水沖洗,。
4. 不要使用過了有效日期的試劑盒,；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低,；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑,。
5. 保存試劑盒于2-8℃，不要冷凍,，將不用的微孔板放進自封袋重新密封,。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下,。
6. 顯色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450nm）值小于0.5（A450nm<0.5 ）時,，表示試劑可能變質(zhì),。
7. 在加入底物液后，一般顯色15分鐘即可,。若顏色較淺,，可延長反應(yīng)時間到20分鐘（或更長），但不得超過30分鐘,。反之,，則減短反應(yīng)時間。
8. 該試劑盒佳反應(yīng)溫度為25℃,，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化,。

11、貯藏條件及保存期

貯藏條件：在2～8℃保存試劑盒

保存期：本試劑盒有效期為12個月,。